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1，下列各句中沒有語病的一句是
2，王洪新名字含義寓意王洪新這個名字怎么樣
3，鞍山十大杰出青年周浩
4，江南大學食品學院研究生導師研究方向及聯(lián)系方式
5，膜蛋白核蛋白糖蛋白脂蛋白異同點及這些蛋白的分離方法和分離
6，蛋白質(zhì)分離方法有哪些它們的特點各是什么
7，蛋白質(zhì)分離方法有哪些它們的特點各是什么

1，下列各句中沒有語病的一句是

答案D句中“高科技產(chǎn)品……申報專利”，主謂不配合。B句應去掉“以”和“為”。C句不合邏輯。說完成計劃的53%，是沒有完成計劃，何來“超額完成”？這句可說“超額53%完成計劃”。

2，王洪新名字含義寓意王洪新這個名字怎么樣

王洪新名字含義王洪新名字的含義為德高望重、學識淵博、功成名就、知識淵博、功名蓋世、洪福齊天、清新俊逸、青出于藍、欣欣向榮之義。王洪新名字含義具體解析如下：王讀wáng；王字音調(diào)為：陽平；王字聲母為：W；王字韻母為：áng；簡體筆畫：4畫；王字五行為：土；王字含義：王字指地位、圣帝明王、學識之義。洪讀hóng；洪字音調(diào)為：陽平；洪字聲母為：Zh；洪字韻母為：óng；簡體筆畫：9畫；洪字五行為：水；洪字含義：洪字指洪仁、洪亮、洪濤、博大之義。新讀xīn；新字音調(diào)為：陰平；新字聲母為：X；新字韻母為：īn；簡體筆畫：13畫；新字五行為：金；新字含義：新字指更新、新鮮、清新、新近之義。王洪新名字寓意王洪新名字寓指清純、多才、財富、溫柔、可愛、魅力之意。與洪字搭配的名字有：王洪科，王洪慧，王洪蕊，王洪煒，王洪洋與新字搭配的名字有：王葉新，王一新，王雅新，王鴻新，王利新王洪新名字好不好王洪新名字整體一般，三才五格打分76分，具體好不好還需要結(jié)合個人生辰八字來查看，不懂八字的朋友可以直接找林大師幫你免費查看名字適不適合你。其中人格為兇，總格半吉。王洪新名字打分為84分，同三才五格打分，本次名字打分沒有參考個人生辰八字，生肖，星座，易經(jīng)卦象，更精準打分請點官方服務菜單中的姓名測試服務，九大維度精準打分評定名字好不好。天地人三才為：土火火三才寓意為：雖容易成功達到目的,但缺乏耐久力?！　√旄瘢? （五行之數(shù)）五行俱權(quán)，循環(huán)相生，圓通暢達，福祉無窮。地格：23 （壯麗）旭日東升，壯麗壯觀，權(quán)威旺盛，功名榮達。人格：14 （破兆）家庭緣薄，孤獨遭難，謀事不達，悲慘不測。外格：14 （破兆）家庭緣薄，孤獨遭難，謀事不達，悲慘不測?？偢瘢?7 （增長）欲望無止，自我強烈，多受毀謗，尚可成功。王姓寶寶名字大全王鍇臻、王阿鷺、王琇喬、王先妃、王效慢、王白玟、王竺沅、王兒沂、王鳳趙、王晃亦、王迪頻、王干限、王芝僖、王黎嘎、王瑛頓、王優(yōu)鼓、王冰月、王嘉炳、王綰繹、王辰措、王康才、王歆麥、王宸翧、王影憐、王代劼、王籃竺、王歌果、王男礎、王祿裴、王嗣鈺、王椅苒、王蒙旦、王蔚烏、王瑾焱、王勃越、王湘笑、王淼僖、王真可、王葉樂、王莎倍、王巍甌、王昭悅、王想露、王允惇、王泓莫、王卞翎、王雁卜、王罩衣、王月文、王厚靚、王柔峙、王木每、王定青、王夕童、王君穗、王孚嶸、王碧粉、王紅謹、王銳佳、王碧渡、王昺謙、王素知、王毓鏗、王尹娉、王允瑋、王羽越、王楚童、王羽璀、王君衣、王小嘉、王莀然、王禎倉、王昕玖、王硒愔、王宏異、王珂成、王材睿、王浩櫳、王鑾冊、王婕淋、王佳準、王火桐、王雨秦、王絲閆、王嫣蓀、王功嘯、王容字、王麗锃、王葉沐、王眩儀、王典秋、王然珍、王如梓、王珠娃、王迪儂、王柚靈、王聲佰、王淼凇、王俐蓁、王逸厚以上為王洪新名字含義，王洪新名字寓意以及王洪新名字怎么樣打分測評的內(nèi)容，可點下邊官方服務選姓名測試進行綜合測名打分，姓名測試結(jié)合了生辰八字，性別，生肖，星座，易經(jīng)卦象，更全面專業(yè)的解析合字匹配和吉兇。好名助運一生，名字一定要結(jié)合具體生辰八字來起，底部服務菜單中的寶寶起名，是基于生辰八字及三才五格的大師精選名字起名，也可找林子翔林大師為寶寶一對一手工定制一個吉祥好名，林大師為起名網(wǎng)創(chuàng)始人，中國十大姓名學大師之首，網(wǎng)上假冒多，一定要視頻核對為林大師本人。好名幸福一生！

王洪新名字含義寓意王洪新這個名字怎么樣

3，鞍山十大杰出青年周浩

第13屆：王誠宏鞍山市湯崗子醫(yī)院七病房副主任王洪新鞍山寶得鋼鐵有限公司常務副總經(jīng)理、總工程白海鞍鋼股份有限公司第一煉鋼廠煉鋼作業(yè)區(qū)乙班5號轉(zhuǎn)爐爐長孫靖邦鞍山市*局刑偵支隊重案三大隊副大隊長李識金千山晚報青少年活動中心副主任何憲恕海城后英經(jīng)貿(mào)集團公司董事長張延東鞍山市地方稅務局鐵東分局站前所所長柏劍鞍山市第二中學體育教師唐鵬鞍山市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心副主任路璞鞍山移動通信公司網(wǎng)絡部副經(jīng)理第14屆：第十四屆“鞍山十大杰出青年”名單（以姓氏筆畫為序）馮尚軍鞍山市金普醫(yī)院院長盧艷青遼寧科技大學材料與冶金學院副教授冉志江鞍山市消防支隊特勤中隊特勤班長劉太東鞍鋼股份煉鐵總廠5高爐作業(yè)區(qū)副作業(yè)長李燚鞍山電視臺廣告節(jié)目部主任張鐵漢鞍山市商業(yè)銀行騰鰲支行行長金玉瑩鞍山市紀委案件審理室副主任洪海遼寧紫竹集團董事長郭喜德鞍山市佳泰企業(yè)總經(jīng)理甄理鞍山市*局治安管理支隊副大隊長

鞍山十大杰出青年周浩

4，江南大學食品學院研究生導師研究方向及聯(lián)系方式

營養(yǎng)有樂國偉施用暉王洪新王周平朱建津孫進什么的安全的是姚衛(wèi)榮張根義孫秀蘭張?zhí)?沈小芳汪何雅：象牙塔考研時間：2010-03-05 11:00 序號專業(yè) 名稱導師姓名備注 1 食品科學湯堅、夏文水、張慜、江波、張曉鳴、熊幼翎、張灝、王洪新、楊瑞金、楊嚴俊、陳潔、麻建國、潘蓓蕾、米尼、崔武衛(wèi)、佟建明、陳永泉、郭本恒、鞠興榮、張根義、鐘芳、王淼、盧蓉蓉、王周平、王磊食品學院 2 糧食、油脂及植物蛋白工程樂國偉、金征宇、周惠明、陳正行、王興國、黃衛(wèi)寧、顧正彪、華欲飛、張暉、徐學明、王強、徐子偉食品學院 3 農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程張慜、陳正行、王強、Arun S.Mujumdar 食品學院 4 水產(chǎn)品加工及貯藏工程夏文水、過世東、薛長湖食品學院 5 動物營養(yǎng)與飼料科學過世東食品學院 6 制糖工程金征宇、童群義食品學院 7 食品營養(yǎng)與安全* 樂國偉、湯堅、胥傳來、劉秀梅、錢和、王利兵食品學院 8 食品貿(mào)易與文化* 周惠明食品學院姚淦銘文學院李曉鐘、吳林海、王詠紅

5，膜蛋白核蛋白糖蛋白脂蛋白異同點及這些蛋白的分離方法和分離

膜蛋白：http://baike.baidu.com/view/145802.htm核蛋白：http://baike.baidu.com/view/264309.htm糖蛋白：http://baike.baidu.com/view/184084.htm脂蛋白：http://baike.baidu.com/view/133314.htm異同點：化學本質(zhì)都是蛋白質(zhì)，只不過糖蛋白有糖側(cè)鏈而已，所在位置不同，發(fā)揮的作用也不相同。蛋白質(zhì)的分離方法及原理：1. 根據(jù)分子大小不同進行分離純化蛋白質(zhì)是一種大分子物質(zhì),并且不同蛋白質(zhì)的分子大小不同,因此可以利用一些較簡單的方法使蛋白質(zhì)和小分子物質(zhì)分開,并使蛋白質(zhì)混合物也得到分離。根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同進行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過濾等。2.根據(jù)溶解度不同進行分離純化影響蛋白質(zhì)溶解度的外部條件有很多,比如溶液的pH值、離子強度、介電常數(shù)和溫度等。但在同一條件下,不同的蛋白質(zhì)因其分子結(jié)構(gòu)的不同而有不同的溶解度,根據(jù)蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的特點,適當?shù)馗淖兺獠織l件,就可以選擇性地控制蛋白質(zhì)混合物中某一成分的溶解度,達到分離純化蛋白質(zhì)的目的。常用的方法有等電點沉淀和pH值調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析、有機溶劑法、雙水相萃取法、反膠團萃取法等。等電點沉淀和pH值調(diào)節(jié)是最常用的方法。每種蛋白質(zhì)都有自己的等電點,而且在等電點時溶解度最低;相反,有些蛋白質(zhì)在一定pH值時很容易溶解。因而可以通過調(diào)節(jié)溶液的pH值來分離純化蛋白質(zhì)。王洪新等[8]研究茶葉蛋白質(zhì)提取過程發(fā)現(xiàn),pH值為時茶葉蛋白提取效果最好,提取率達到36·8%,初步純化得率為91·0%。李殿寶[9]在從葵花脫脂粕中提取蛋白質(zhì)時將蛋白溶液的pH值調(diào)到3~4,使目標蛋白于等電點沉淀出來。等電點沉淀法還應用于葡萄籽中蛋白質(zhì)的提取。李鳳英等[10]測得葡萄籽蛋白質(zhì)的等電點為3·8。他們利用堿溶法提取葡萄籽蛋白質(zhì),得到了最佳的提取工藝為:以1×10-5mol·L-1的NaOH溶液,按1∶5的料液比,在40℃攪拌40 min,葡萄籽蛋白質(zhì)提取率達73·78%。另外還可以利用堿法提取大米蛋白,其持水性、吸油性和起泡性等均優(yōu)于酶法提取[11]。利用酸法提取得到的鰱魚魚肉蛋白質(zhì)無腥味、色澤潔白,蛋白質(zhì)產(chǎn)率高達90%[12]。蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析是中性鹽顯著影響球狀蛋白質(zhì)溶解度的現(xiàn)象,其中,增加蛋白質(zhì)溶解度的現(xiàn)象稱鹽溶,反之為鹽析。應當指出,同樣濃度的二價離子中性鹽,如MgCl2、(NH4)2SO4對蛋白質(zhì)溶解度影響的效果,要比一價離子中性鹽如NaCl、NH4Cl大得多。在葡萄籽蛋白提取工藝中除了可以利用堿溶法還可以利用鹽溶法來提取蛋白質(zhì),其最佳提取工藝是:以10%NaCl溶液,按1∶25的料液比,在30℃攪拌提取30min,蛋白質(zhì)提取率為57·25%[10]。鹽析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法,如多聚磷酸鈉絮凝法、硫酸銨鹽析法,其中硫酸銨鹽析法廣泛應用于生產(chǎn)。由于硫酸銨在水中呈酸性,為防止其對蛋白質(zhì)的破壞,應用氨水調(diào)pH值至中性。為防止不同分子之間產(chǎn)生共沉淀現(xiàn)象,蛋白質(zhì)樣品的含量一般控制在0·2% ~2·0%。利用鹽溶和鹽析對蛋白質(zhì)進行提純后,通常要使用透析或者凝膠過濾的方法除去中性鹽[13]。有機溶劑提取法的原理是:與水互溶的有機溶劑(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低;而且在一定溫度、pH值和離子強度下,引起蛋白質(zhì)沉淀的有機溶劑的濃度不同,因此,控制有機溶劑的濃度可以分離純化蛋白質(zhì)。例如,在冰浴中磁力攪拌下,在4℃預冷的培養(yǎng)液中緩慢加入乙醇(-25℃),可以使冰核蛋白析出,從而純化冰核蛋白[14]。由于在室溫下,有機溶劑不僅能引起蛋白質(zhì)的沉淀,而且伴隨著變性。因此,通常要將有機溶劑冷卻,然后在不斷攪拌下加入有機溶劑防止局部濃度過高,蛋白質(zhì)變性問題就可以很大程度上得到解決。對于一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中極性側(cè)鏈較多、不溶于水的蛋白質(zhì),可以用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑提取,它們有一定的親水性和較強的親脂性,是理想的提取液。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白最早由Cohn于1949年提出,用于制備丙種球蛋白。冷乙醇法也是目前WHO規(guī)程和中國生物制品規(guī)程推薦的方法,不僅分辨率高、提純效果好、可同時分離多種血漿成分,而且有抑菌、清除和滅病毒的作用[15]。萃取是分離和提純有機化合物常用的一種方法,而雙水相萃取和反膠團萃取可以用來分離蛋白質(zhì)。雙水相萃取技術(shù)(Aqueous two phase extraction,ATPE)是指親水性聚合物水溶液在一定條件下形成雙水相,由于被分離物在兩相中分配的不同,便可實現(xiàn)分離,被廣泛用于生物化學、細胞生物學和生物化工等領(lǐng)域的產(chǎn)品分離和提取。此方法可以在室溫環(huán)境下進行,雙水相中的聚合物還可以提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,收率較高。對于細胞內(nèi)的蛋白質(zhì),需要先對細胞進行有效破碎。目的蛋白常分布在上相并得到濃縮,細胞碎片等固體物分布在下相中。采用雙水相系統(tǒng)濃縮目的蛋白,受聚合物分子量及濃度、溶液pH值、離子強度、鹽類型及濃度的影響[16]。反膠團萃取法是利用反膠團將蛋白質(zhì)包裹其中而達到提取蛋白質(zhì)的目的。反膠團是當表面活性劑在非極性有機溶劑溶解時自發(fā)聚集而形成的一種納米尺寸的聚集體。這種方法的優(yōu)點是萃取過程中蛋白質(zhì)因位于反膠團的內(nèi)部而受到反膠團的保護。程世賢等[17]就利用反膠團萃取法提取了大豆中的蛋白質(zhì)。3.根據(jù)電荷不同進行分離純化根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷即酸堿性質(zhì)不同分離蛋白質(zhì)的方法有電泳和離子交換層析兩類。在外電場的作用下,帶電顆粒(如不處于等電點狀態(tài)的蛋白質(zhì)分子)將向著與其電性相反的電極移動,這種現(xiàn)象稱為電泳。聚丙烯酰胺電泳是一種以聚丙烯酰胺為介質(zhì)的區(qū)帶電泳,常用于分離蛋白質(zhì)。它的優(yōu)點是設備簡單、操作方便、樣品用量少。等電聚焦是一種高分辨率的蛋白質(zhì)分離技術(shù),也可以用于蛋白質(zhì)的等電點測定。利用等電聚焦技術(shù)分離蛋白質(zhì)混合物是在具有pH梯度的介質(zhì)中進行的。在外電場作用下各種蛋白質(zhì)將移向并聚焦在等于其等電點的pH值梯度處形成一個窄條帶。孫臣忠等[18]研究了聚丙烯酰胺電泳、等電聚焦電泳和等速提純電泳在分離純化蛋白質(zhì)中的應用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),聚丙烯酰胺電泳的條帶分辨率低,加樣量不高;等電聚焦電泳分辨率最高,可以分離同種蛋白的亞成分,加樣量最小;等速提純電泳區(qū)帶分辨率較高,可將樣品分成單一成分,加樣量最大。離子交換層析(Ion exchange chromatography,IEC)是以離子交換劑為固定相,依據(jù)流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時結(jié)合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。離子交換層析中,基質(zhì)由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的為陰離子交換樹脂;反之為陽離子交換樹脂。離子交換層析同樣可以用于蛋白質(zhì)的分離純化。當?shù)鞍踪|(zhì)處于不同的pH值條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有負電荷的蛋白質(zhì),被留在層析柱上,通過提高洗脫液中的鹽濃度,將吸附在層析柱上的蛋白質(zhì)洗脫下來,其中結(jié)合較弱的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有正電荷的蛋白質(zhì),結(jié)合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。李全宏等[19]將離子交換層析應用于濃縮蘋果汁中蛋白質(zhì)的提純。另外,離子交換層析還用于抗凝血蛋白的提取[7]。4. 利用對配體的特異親和力進行分離純化親和層析是利用蛋白質(zhì)分子對其配體分子特有的識別能力(即生物學親和力)建立起來的一種有效的純化方法。它通常只需一步處理即可將目的蛋白質(zhì)從復雜的混合物中分離出來,并且純度相當高。應用親和層析須了解純化物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和生物學特性,以便設計出最好的分離條件。近年來,親和層析技術(shù)被廣泛應用于靶標蛋白尤其是疫苗的分離純化,特別是在融合蛋白的分離純化上,親和層析更是起到了舉足輕重的作用,因為融合蛋白具有特異性結(jié)合能力[20]。親和層析在基因工程亞單位疫苗的分離純化中應用也相當廣泛[21]。范繼業(yè)等[22]利用殼聚糖親和層析提取的抑肽酶比活達到71 428 BAEE·mg-1,純化回收率達到62·5%。該方法成本較低,吸附劑價格低廉、機械強度高、抗污染能力較強、非特異性吸附較小、可反復使用、適用性廣,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

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6，蛋白質(zhì)分離方法有哪些它們的特點各是什么

1.根據(jù)分子大小不同進行分離純化蛋白質(zhì)是一種大分子物質(zhì),并且不同蛋白質(zhì)的分子大小不同,因此可以利用一些較簡單的方法使蛋白質(zhì)和小分子物質(zhì)分開,并使蛋白質(zhì)混合物也得到分離。根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同進行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過濾等。透析和超濾是分離蛋白質(zhì)時常用的方法。透析是將待分離的混合物放入半透膜制成的透析袋中,再浸入透析液進行分離。超濾是利用離心力或壓力強行使水和其它小分子通過半透膜,而蛋白質(zhì)被截留在半透膜上的過程。這兩種方法都可以將蛋白質(zhì)大分子與以無機鹽為主的小分子分開。它們經(jīng)常和鹽析、鹽溶方法聯(lián)合使用,在進行鹽析或鹽溶后可以利用這兩種方法除去引入的無機鹽。由于超濾過程中,濾膜表面容易被吸附的蛋白質(zhì)堵塞,以致超濾速度減慢,截流物質(zhì)的分子量也越來越小。所以在使用超濾方法時要選擇合適的濾膜,也可以選擇切向流過濾得到更理想的效果離心也是經(jīng)常和其它方法聯(lián)合使用的一種分離蛋白質(zhì)的方法。當?shù)鞍踪|(zhì)和雜質(zhì)的溶解度不同時可以利用離心的方法將它們分開。例如,在從大米渣中提取蛋白質(zhì)的實驗中,加入纖維素酶和α-淀粉酶進行預處理后,再用離心的方法將有用物質(zhì)與分解掉的雜質(zhì)進行初步分離[3]。使蛋白質(zhì)在具有密度梯度的介質(zhì)中離心的方法稱為密度梯度(區(qū)帶)離心。常用的密度梯度有蔗糖梯度、聚蔗糖梯度和其它合成材料的密度梯度?？梢愿鶕?jù)所需密度和滲透壓的范圍選擇合適的密度梯度。密度梯度離心曾用于純化蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白,得到的產(chǎn)品純度高但產(chǎn)量偏低。蔣辰等[6]通過比較不同密度梯度介質(zhì)的分離效果,利用溴化鈉密度梯度得到了高純度的蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白。凝膠過濾也稱凝膠滲透層析,是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同分離蛋白質(zhì)最有效的方法之一。凝膠過濾的原理是當不同蛋白質(zhì)流經(jīng)凝膠層析柱時,比凝膠珠孔徑大的分子不能進入珠內(nèi)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),而被排阻在凝膠珠之外,隨著溶劑在凝膠珠之間的空隙向下運動并最先流出柱外;反之,比凝膠珠孔徑小的分子后流出柱外。目前常用的凝膠有交聯(lián)葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠等。在甘露糖蛋白提純的過程中使用凝膠過濾方法可以得到很好的效果,純度鑒定證明產(chǎn)品為分子量約為32 kDa、成分是多糖∶蛋白質(zhì)(88∶12)、多糖為甘露糖的單一均勻糖蛋白[1]。凝膠過濾在抗凝血蛋白的提取過程中也被用來除去大多數(shù)雜蛋白及小分子的雜質(zhì)[7]。 2.根據(jù)溶解度不同進行分離純化影響蛋白質(zhì)溶解度的外部條件有很多,比如溶液的pH值、離子強度、介電常數(shù)和溫度等。但在同一條件下,不同的蛋白質(zhì)因其分子結(jié)構(gòu)的不同而有不同的溶解度,根據(jù)蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的特點,適當?shù)馗淖兺獠織l件,就可以選擇性地控制蛋白質(zhì)混合物中某一成分的溶解度,達到分離純化蛋白質(zhì)的目的。常用的方法有等電點沉淀和pH值調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析、有機溶劑法、雙水相萃取法、反膠團萃取法等。等電點沉淀和pH值調(diào)節(jié)是最常用的方法。每種蛋白質(zhì)都有自己的等電點,而且在等電點時溶解度最低;相反,有些蛋白質(zhì)在一定pH值時很容易溶解。因而可以通過調(diào)節(jié)溶液的pH值來分離純化蛋白質(zhì)。王洪新等[8]研究茶葉蛋白質(zhì)提取過程發(fā)現(xiàn),pH值為時茶葉蛋白提取效果最好,提取率達到36·8%,初步純化得率為91·0%。李殿寶[9]在從葵花脫脂粕中提取蛋白質(zhì)時將蛋白溶液的pH值調(diào)到3~4,使目標蛋白于等電點沉淀出來。等電點沉淀法還應用于葡萄籽中蛋白質(zhì)的提取。李鳳英等[10]測得葡萄籽蛋白質(zhì)的等電點為3·8。他們利用堿溶法提取葡萄籽蛋白質(zhì),得到了最佳的提取工藝為:以1×10-5mol·L-1的NaOH溶液,按1∶5的料液比,在40℃攪拌40 min,葡萄籽蛋白質(zhì)提取率達73·78%。另外還可以利用堿法提取大米蛋白,其持水性、吸油性和起泡性等均優(yōu)于酶法提取[11]。利用酸法提取得到的鰱魚魚肉蛋白質(zhì)無腥味、色澤潔白,蛋白質(zhì)產(chǎn)率高達90%[12]。蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析是中性鹽顯著影響球狀蛋白質(zhì)溶解度的現(xiàn)象,其中,增加蛋白質(zhì)溶解度的現(xiàn)象稱鹽溶,反之為鹽析。應當指出,同樣濃度的二價離子中性鹽,如MgCl2、(NH4)2SO4對蛋白質(zhì)溶解度影響的效果,要比一價離子中性鹽如NaCl、NH4Cl大得多。在葡萄籽蛋白提取工藝中除了可以利用堿溶法還可以利用鹽溶法來提取蛋白質(zhì),其最佳提取工藝是:以10%NaCl溶液,按1∶25的料液比,在30℃攪拌提取30min,蛋白質(zhì)提取率為57·25%[10]。鹽析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法,如多聚磷酸鈉絮凝法、硫酸銨鹽析法,其中硫酸銨鹽析法廣泛應用于生產(chǎn)。由于硫酸銨在水中呈酸性,為防止其對蛋白質(zhì)的破壞,應用氨水調(diào)pH值至中性。為防止不同分子之間產(chǎn)生共沉淀現(xiàn)象,蛋白質(zhì)樣品的含量一般控制在0·2% ~2·0%。利用鹽溶和鹽析對蛋白質(zhì)進行提純后,通常要使用透析或者凝膠過濾的方法除去中性鹽[13]。有機溶劑提取法的原理是:與水互溶的有機溶劑(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低;而且在一定溫度、pH值和離子強度下,引起蛋白質(zhì)沉淀的有機溶劑的濃度不同,因此,控制有機溶劑的濃度可以分離純化蛋白質(zhì)。例如,在冰浴中磁力攪拌下,在4℃預冷的培養(yǎng)液中緩慢加入乙醇(-25℃),可以使冰核蛋白析出,從而純化冰核蛋白[14]。由于在室溫下,有機溶劑不僅能引起蛋白質(zhì)的沉淀,而且伴隨著變性。因此,通常要將有機溶劑冷卻,然后在不斷攪拌下加入有機溶劑防止局部濃度過高,蛋白質(zhì)變性問題就可以很大程度上得到解決。對于一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中極性側(cè)鏈較多、不溶于水的蛋白質(zhì),可以用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑提取,它們有一定的親水性和較強的親脂性,是理想的提取液。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白最早由Cohn于1949年提出,用于制備丙種球蛋白。冷乙醇法也是目前WHO規(guī)程和中國生物制品規(guī)程推薦的方法,不僅分辨率高、提純效果好、可同時分離多種血漿成分,而且有抑菌、清除和滅病毒的作用[15]。萃取是分離和提純有機化合物常用的一種方法,而雙水相萃取和反膠團萃取可以用來分離蛋白質(zhì)。雙水相萃取技術(shù)(Aqueous two phase extraction,ATPE)是指親水性聚合物水溶液在一定條件下形成雙水相,由于被分離物在兩相中分配的不同,便可實現(xiàn)分離,被廣泛用于生物化學、細胞生物學和生物化工等領(lǐng)域的產(chǎn)品分離和提取。此方法可以在室溫環(huán)境下進行,雙水相中的聚合物還可以提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,收率較高。對于細胞內(nèi)的蛋白質(zhì),需要先對細胞進行有效破碎。目的蛋白常分布在上相并得到濃縮,細胞碎片等固體物分布在下相中。采用雙水相系統(tǒng)濃縮目的蛋白,受聚合物分子量及濃度、溶液pH值、離子強度、鹽類型及濃度的影響[16]。反膠團萃取法是利用反膠團將蛋白質(zhì)包裹其中而達到提取蛋白質(zhì)的目的。反膠團是當表面活性劑在非極性有機溶劑溶解時自發(fā)聚集而形成的一種納米尺寸的聚集體。這種方法的優(yōu)點是萃取過程中蛋白質(zhì)因位于反膠團的內(nèi)部而受到反膠團的保護。程世賢等[17]就利用反膠團萃取法提取了大豆中的蛋白質(zhì)。 3.根據(jù)電荷不同進行分離純化根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷即酸堿性質(zhì)不同分離蛋白質(zhì)的方法有電泳和離子交換層析兩類。在外電場的作用下,帶電顆粒(如不處于等電點狀態(tài)的蛋白質(zhì)分子)將向著與其電性相反的電極移動,這種現(xiàn)象稱為電泳。聚丙烯酰胺電泳是一種以聚丙烯酰胺為介質(zhì)的區(qū)帶電泳,常用于分離蛋白質(zhì)。它的優(yōu)點是設備簡單、操作方便、樣品用量少。等電聚焦是一種高分辨率的蛋白質(zhì)分離技術(shù),也可以用于蛋白質(zhì)的等電點測定。利用等電聚焦技術(shù)分離蛋白質(zhì)混合物是在具有pH梯度的介質(zhì)中進行的。在外電場作用下各種蛋白質(zhì)將移向并聚焦在等于其等電點的pH值梯度處形成一個窄條帶。孫臣忠等[18]研究了聚丙烯酰胺電泳、等電聚焦電泳和等速提純電泳在分離純化蛋白質(zhì)中的應用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),聚丙烯酰胺電泳的條帶分辨率低,加樣量不高;等電聚焦電泳分辨率最高,可以分離同種蛋白的亞成分,加樣量最小;等速提純電泳區(qū)帶分辨率較高,可將樣品分成單一成分,加樣量最大。離子交換層析(Ion exchange chromatography,IEC)是以離子交換劑為固定相,依據(jù)流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時結(jié)合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。離子交換層析中,基質(zhì)由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的為陰離子交換樹脂;反之為陽離子交換樹脂。離子交換層析同樣可以用于蛋白質(zhì)的分離純化。當?shù)鞍踪|(zhì)處于不同的pH值條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有負電荷的蛋白質(zhì),被留在層析柱上,通過提高洗脫液中的鹽濃度,將吸附在層析柱上的蛋白質(zhì)洗脫下來,其中結(jié)合較弱的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有正電荷的蛋白質(zhì),結(jié)合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。李全宏等[19]將離子交換層析應用于濃縮蘋果汁中蛋白質(zhì)的提純。另外,離子交換層析還用于抗凝血蛋白的提取[7]。 4. 利用對配體的特異親和力進行分離純化親和層析是利用蛋白質(zhì)分子對其配體分子特有的識別能力(即生物學親和力)建立起來的一種有效的純化方法。它通常只需一步處理即可將目的蛋白質(zhì)從復雜的混合物中分離出來,并且純度相當高。應用親和層析須了解純化物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和生物學特性,以便設計出最好的分離條件。近年來,親和層析技術(shù)被廣泛應用于靶標蛋白尤其是疫苗的分離純化,特別是在融合蛋白的分離純化上,親和層析更是起到了舉足輕重的作用,因為融合蛋白具有特異性結(jié)合能力[20]。親和層析在基因工程亞單位疫苗的分離純化中應用也相當廣泛[21]。范繼業(yè)等[22]利用殼聚糖親和層析提取的抑肽酶比活達到71 428 BAEE·mg-1,純化回收率達到62·5%。該方法成本較低,吸附劑價格低廉、機械強度高、抗污染能力較強、非特異性吸附較小、可反復使用、適用性廣,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

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